農(nóng)作物秸稈能源化利用技術(shù)是緩解當(dāng)今我國面臨的“糧食、能源、環(huán)境”三大危機的有效途徑之一,厭氧發(fā)酵技術(shù)作為生物質(zhì)能主要利用技術(shù)已廣受關(guān)注。厭氧發(fā)酵技術(shù)可分為單相厭氧發(fā)酵技術(shù)、兩相厭氧發(fā)酵技術(shù)、混合厭氧發(fā)酵技術(shù)。單相厭氧發(fā)酵的整個發(fā)酵過程在同一個反應(yīng)器內(nèi)進行,工藝簡單,能夠有效處理總固體含量為20%~40%的有機固體廢物,比利時的dranco 工藝,丹麥的 Carbro工藝和法國的 Valorga 工藝等,都是已經(jīng)實現(xiàn)工程化應(yīng)用的單相厭氧發(fā)酵工藝[1]。兩相厭氧發(fā)酵工藝中的產(chǎn)酸階段和產(chǎn)甲烷階段是2 個獨立的處理單元,各自形成產(chǎn)酸發(fā)酵微生物和產(chǎn)甲烷微生物的最佳生態(tài)條件,使其分別發(fā)揮最大的代謝能力,避免了傳統(tǒng)的單相厭氧發(fā)酵工藝中微生物之間和代謝產(chǎn)物對微生物的抑制作用,從而使整個工藝達到最好的處理效果[2]~[5]。本文介紹了近年來國內(nèi)外秸稈兩相厭氧發(fā)酵工藝的研究進展,主要從秸稈原料的預(yù)處理、 水解酸化工藝條件的控制和兩相厭氧發(fā)酵工藝設(shè)備等3 個方面進行說明。
1 秸稈原料的預(yù)處理
秸稈中的有機成分以纖維素、半纖維素為主,其次為木質(zhì)素、蛋白質(zhì)、氨基酸、樹脂、單寧等[6]。
秸稈中的木質(zhì)素包裹在纖維素和半纖維素的表面,阻礙了酶和微生物與纖維素、半纖維素的充分接觸,因此,纖維素和半纖維素的水解就成為秸稈類原料生物降解的限制步驟[7]。因此,在進行厭氧發(fā)酵之前,必須對農(nóng)作物秸稈進行預(yù)處理。常用的預(yù)處理方法包括物理處理法、化學(xué)處理法和生物處理法。
物理處理法主要是指采用切碎、研磨等機械方法或采用熱處理的方法改變秸稈的外部形態(tài)或內(nèi)部結(jié)構(gòu)。切碎和研磨都能破壞植物的纖維素構(gòu)造,增大原料中纖維素和木質(zhì)素與微生物的接觸面積,有利于水解反應(yīng)的進行[8]。研磨比切碎更有利于破壞秸稈中的木質(zhì)素結(jié)構(gòu),因此一般認為研磨比切碎效果更好。Zhang Ruihong 在利用稻草發(fā)酵產(chǎn)沼氣的研究過程中,比較了切碎和研磨這2種預(yù)處理方法對產(chǎn)氣率的影響,結(jié)果表明,切碎和研磨都能提高秸稈的產(chǎn)氣率,但是切碎與未切碎相比,產(chǎn)氣速率和產(chǎn)氣潛能變化不明顯,而研磨和切碎在相同的顆粒度(2.5 mm)情況下,研磨的產(chǎn)氣率比切碎提高了12.2%[9]。蒸汽爆裂法是熱處理方法的一種,這種方法是利用飽和蒸汽處理原料,然后突然減壓,造成纖維晶體爆裂,起到分離木質(zhì)素的作用[7],[10]。Chen Hongzhang 研究了蒸汽爆裂法處理麥草秸稈對厭氧發(fā)酵效果的影響,結(jié)果表明,汽爆麥草發(fā)酵后料液中的 TS 和 VS 含量分別比未處理的麥草降低了57.5%和62.1%,纖維素和半纖維素的降解率也有顯著提高,分別為63.0%和67.4%,但木質(zhì)素的降解率變化不大,為5%左右[11]。
化學(xué)處理法主要是利用酸或堿對原料進行預(yù)處理,破壞細胞壁中半纖維素與木質(zhì)素形成的共價鍵,從而達到提高秸稈消化率的目的[12]。堿液中的 OH-能削弱纖維素和半纖維素之間的氫鍵,皂化半纖維素和木質(zhì)素之間的酯鍵,分離半纖維素和木質(zhì)素的醚鍵,溶解半纖維素,從而有利于酶和纖維素的接觸。周俊虎在利用稻草發(fā)酵產(chǎn)氫的研究中,將稻草浸泡在12%的 NaOH溶液中,在70℃下持續(xù)浸泡4 h,處理結(jié)果表明,NaOH預(yù)處理可以去除稻草中大部分木質(zhì)素,使纖維素和半纖維素質(zhì)量分?jǐn)?shù)均有所提高,經(jīng)過酶解后糖化率可達80.19%[13]。酸處理主要是利用稀酸將秸稈原料中的半纖維素部分溶解,以達到使原料結(jié)構(gòu)疏松的目的。宋安東在研究化學(xué)預(yù)處理方法對玉米秸稈酶解糖化效果的影響時發(fā)現(xiàn),采用0.5%的稀鹽酸在121 ℃下預(yù)處理40 目玉米秸稈粉60 min,然后進行酶解糖化試驗,發(fā)現(xiàn)玉米秸稈的纖維素和半纖維素轉(zhuǎn)化率達到了80.8%[14]?;瘜W(xué)處理法還包括濕式氧化處理工藝,該工藝是在高溫、高壓及堿性條件下對原料進行預(yù)處理,使原料中的半纖維素和木質(zhì)素充分溶解、分離和降解,剩余的固體物質(zhì)——纖維素則更容易被纖維素酶水解成可發(fā)酵性糖。侯霖采用濕式氧化法對玉米秸稈進行預(yù)處理時發(fā)現(xiàn),在處理溫度為170℃,Na2CO3 用量為2 g,預(yù)處理時間為8 min 條件下,玉米秸稈的纖維素得率為75.6%,預(yù)處理后原料酶解率達82.5%[15]。
生物處理法就是在人工控制條件下,利用一些細菌、真菌等微生物的發(fā)酵作用來處理秸稈。楊玉楠在利用白腐菌預(yù)處理秸稈發(fā)酵產(chǎn)甲烷的研究中發(fā)現(xiàn),稻草秸稈的結(jié)構(gòu)受到破壞,木質(zhì)素含量降低,大大縮短了厭氧發(fā)酵周期,提高了甲烷轉(zhuǎn)化效率[16]。他們在室溫下用白腐菌預(yù)處理20d,厭氧發(fā)酵15d,測得甲烷轉(zhuǎn)化率為47.63%,繼續(xù)發(fā)酵10d,甲烷轉(zhuǎn)化率則高達58.74%;在39 ℃的溫度下預(yù)處理10d,發(fā)酵5d,甲烷轉(zhuǎn)化率可以達到53.3%。李連華利用秸稈預(yù)處理菌劑處理稻草秸稈,先將秸稈粉碎,再加入70%的水,1.5%的碳酸氫銨,5%的秸稈預(yù)處理菌劑,預(yù)處理5d 后,測得秸稈總固體含量為26.68%,揮發(fā)性固體含量為21.35%[17]。
2 水解酸化工藝參數(shù)的控制
在兩相厭氧發(fā)酵系統(tǒng)的運行過程中,產(chǎn)酸細菌與產(chǎn)甲烷細菌在物理、 化學(xué)和生物性狀上都會出現(xiàn)顯著差異。產(chǎn)酸細菌主要為兼性厭氧菌,對氧的適應(yīng)性很強;產(chǎn)甲烷細菌為嚴(yán)格厭氧細菌,對氧的反應(yīng)敏感。此外,它們所適應(yīng)的 pH和 Eh 范圍以及所能耐受的 VFA 濃度都不同(表1)[18]。
表1 產(chǎn)酸相與產(chǎn)甲烷相的差異
pH值、溫度、底物組成、TS 等因素對產(chǎn)酸相和產(chǎn)甲烷相的穩(wěn)定運行有著重要的影響。傳統(tǒng)觀點認為厭氧生物處理的限速步驟是產(chǎn)甲烷階段,但是產(chǎn)酸相對系統(tǒng)的穩(wěn)定運行也起著關(guān)鍵的作用[19],產(chǎn)酸相的產(chǎn)物組成對產(chǎn)甲烷相產(chǎn)甲烷的效率有很大影響,對產(chǎn)生甲烷的底物進行分析,結(jié)果表明,28%的甲烷來自氫的氧化和二氧化碳的還原,72%的甲烷來自乙酸的裂解[20]。產(chǎn)甲烷菌對不同有機酸的利用率有很大的差別,研究表明,產(chǎn)甲烷菌在反應(yīng)器相同位置對混合有機酸降解的轉(zhuǎn)化速率依次為乙酸>乙醇>丁酸>丙酸,以乙醇和乙酸為主要末端產(chǎn)物的產(chǎn)酸相乙醇型發(fā)酵有利于產(chǎn)甲烷相功能的發(fā)揮,乙醇型發(fā)酵是充分發(fā)揮兩相厭氧發(fā)酵系統(tǒng)功能的最佳發(fā)酵類型[21]。
pH值對微生物水解酸化過程有著重要的影響,何品晶、張波分別研究了 pH值對有機垃圾和廚余垃圾水解酸化速率的影響,他們發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液在 pH值為7 時最有利于微生物的合成代謝,水解酸化產(chǎn)物中乳酸濃度相對較低,VFA 中以丁酸和乙酸為主,丙酸很少[22],[23]。pH值為7 時,不但可以提高水解酸化效率,而且為后續(xù)產(chǎn)甲烷過程提供了更有利的基質(zhì),從而優(yōu)化了兩相厭氧消化工藝。何品晶還發(fā)現(xiàn)對 pH值不加以控制會嚴(yán)重抑制水解和酸化的過程[23]。張波研究了3 種 pH值調(diào)節(jié)方法(利用 NaOH溶液調(diào)節(jié)初始進料 pH值,利用 NaOH和 Ca(OH)2 混合堿液每12 h 調(diào)節(jié)1 次pH值,利用 C/N 調(diào)節(jié) pH值)對廚余垃圾兩相厭氧發(fā)酵中水解和酸化過程的影響,發(fā)現(xiàn)利用 C/N來調(diào)節(jié) pH值能夠取得更高的水解酸化效率,一級水解速率常數(shù)可達到0.199/d,VFA 濃度在試驗的第3 天即可達到35 g/L,發(fā)酵產(chǎn)物中乳酸在試驗的第2 天即達到高峰濃度24 g/L,后逐漸下降到6 g/L,并且 VFA 組分中丙酸的濃度較低[24]。劉振玲[25]研究了 pH值,TS 和 C/N 對食品廢棄物厭氧消化產(chǎn)乙酸的影響,結(jié)果表明,pH值為6.5,TS含量為7%,C/N 為16∶1 時,總 VFA 的最高濃度為31.56 g/L,乙酸的最高濃度為19.46 g/L。
溫度也是影響兩相厭氧發(fā)酵過程的重要因素,較小范圍的溫度變化也會對發(fā)酵過程產(chǎn)生較大的影響。趙杰紅研究了溫度對廚余垃圾兩相厭氧發(fā)酵中水解和酸化過程的影響,發(fā)現(xiàn)在溫度低于37 ℃范圍內(nèi)水解率和酸化率均隨溫度升高而增加,在37 ℃時 VFA 濃度最高,為34.4 g/L。溫度超過37 ℃后,酸化率下降而水解率繼續(xù)增加,在50 ℃時水解率最高,為82%。VFA 中以甲酸和乙酸為主,并有少量丙酸和丁酸產(chǎn)生,乳酸濃度一直較高。故通過試驗確定了廚余垃圾水解酸化過程的最優(yōu)溫度條件為37 ℃[26]。李連華研究了秸稈在中溫、高溫及環(huán)溫條件下的生物氣產(chǎn)量、發(fā)酵液中乙酸濃度及產(chǎn)氣中甲烷含量的變化情況,比較了不同條件下 TS 和 VS 的去除率及產(chǎn)氣率[17]。研究發(fā)現(xiàn),溫度越高,在相同的時間內(nèi),原料的分解速度也就越快,產(chǎn)氣量也越高。不過,高溫發(fā)酵須要消耗更多的能量,從而會導(dǎo)致能量投入產(chǎn)出效益較低。環(huán)溫發(fā)酵不須要供給能量,但其產(chǎn)氣量受外界環(huán)境溫度影響較大,中溫發(fā)酵不需要或需要較少的能量供給,因此是較理想的厭氧發(fā)酵溫度。吳振興在秸稈兩相厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸相發(fā)酵工藝研究中,通過正交實驗研究了 pH值、反應(yīng)溫度、底物濃度對水稻秸稈厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸效果的影響,結(jié)果表明,最佳的發(fā)酵條件為 pH值為7.0,溫度為35℃,底物濃度為30 g/L[2]。
3 兩相厭氧發(fā)酵工藝反應(yīng)器
兩相厭氧發(fā)酵既可以在2 個獨立的反應(yīng)器中進行,也可以在一個反應(yīng)器的2 個反應(yīng)區(qū)內(nèi)完成。圖1 為 E.R. Vieitez 和 S. Ghosh 在厭氧處理有機固體廢物過程中采用的兩相發(fā)酵工藝試驗裝置[27]。
圖1E.R. Vieitez 和 S. Ghosh采用的兩相發(fā)酵試驗裝置圖
這個裝置主要由一個填充模擬固體廢棄物 (密度為160 kg/m3)的固定床反應(yīng)器和一個產(chǎn)甲烷反應(yīng)器組成,在運行過程中,將固定床反應(yīng)器的濾出液導(dǎo)入產(chǎn)甲烷反應(yīng)器中,產(chǎn)甲烷過程完成后,再將其出水回流到產(chǎn)酸反應(yīng)器中。試驗結(jié)果表明,該兩相厭氧反應(yīng)器能夠穩(wěn)定運行,并且能將高濃度固體有機物的30%轉(zhuǎn)化為甲烷。
劉廣青在進行批式與兩相高溫厭氧發(fā)酵廚余垃圾和雜草廢棄物的對比研究時,使用了如圖2所示的兩相厭氧發(fā)酵裝置,該裝置的反應(yīng)器用有機玻璃制成,主體結(jié)構(gòu)為圓柱型[28],[29]。固體床反應(yīng)器(水解酸化反應(yīng)器)內(nèi)徑12 cm,有效容積1 L;填料序批式反應(yīng)器(甲烷化反應(yīng)器)內(nèi)徑16 cm,有效容積2.2 L。固體床反應(yīng)器頂部設(shè)置出氣口和回流液進口,底部設(shè)置滲濾液出口和采樣口。滲濾液從4 個固體床中流入滲濾液收集箱,然后被泵入甲烷化反應(yīng)器,等量的滲濾液再回流至固體床,如此循環(huán)運行。固體床反應(yīng)器每3d 進1 次料,每次進料97 g(以 VS 計),12d 為1 個發(fā)酵周期。滲濾液每天回流6 次,每次回流量為70 mL。結(jié)果表明,利用兩相厭氧固體床反應(yīng)系統(tǒng)處理廚余垃圾和雜草廢棄物的混合物時,在12d 的消化時間內(nèi),沼氣和甲烷產(chǎn)率分別為530 ml/g 和351 ml/g,系統(tǒng)的 TS 和 VS 去除率分別為78%和82%。他們認為該兩相厭氧固體床反應(yīng)系統(tǒng)負荷高、 產(chǎn)氣穩(wěn)定、周期短,是處理固態(tài)有機廢物的有效方法。
圖2兩相厭氧發(fā)酵產(chǎn)沼氣裝置
針對原料流動性差的特點,Chanakya 設(shè)計了固相床層厭氧反應(yīng)器,即在一個反應(yīng)器內(nèi)形成產(chǎn)酸區(qū)和產(chǎn)甲烷區(qū)來實現(xiàn)兩相發(fā)酵(圖3)[30],[31]。該反應(yīng)器的工作原理:在反應(yīng)器的下部培養(yǎng)一個以生物質(zhì)為填料的富含產(chǎn)甲烷微生物的填料床,在反應(yīng)器的上部添加固態(tài)原料,然后將少量滲濾液噴淋在這些原料上,原料發(fā)生酸化反應(yīng),產(chǎn)生的VFA 隨滲濾液向下進入到產(chǎn)甲烷反應(yīng)區(qū),完成產(chǎn)甲烷過程。由于采用固相發(fā)酵,所以這種反應(yīng)器既能利用新鮮的生物質(zhì)原料,又能處理干生物質(zhì)原料,而且不會產(chǎn)生原料上浮、結(jié)殼問題。該反應(yīng)器的另一大優(yōu)點是反應(yīng)液循環(huán)流動,所以液體只占反應(yīng)器總?cè)莘e的一小部分(5%~10%),反應(yīng)器容積利用率較高。
圖3固相分層床反應(yīng)器
4結(jié)束語
兩相厭氧發(fā)酵工藝中的產(chǎn)酸相和產(chǎn)甲烷相分別為產(chǎn)酸菌和產(chǎn)甲烷菌提供了最佳的生理生態(tài)環(huán)境,因此具有比單相厭氧發(fā)酵工藝更高的處理能力和處理效率,系統(tǒng)的抗沖擊能力和穩(wěn)定性也好于單相系統(tǒng)。但兩相厭氧發(fā)酵系統(tǒng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜,運行成本高,成為推廣兩相厭氧發(fā)酵系統(tǒng)的主要障礙。
本文對秸稈兩相厭氧發(fā)酵技術(shù)中的原料預(yù)處理、水解酸化工藝參數(shù)的控制和兩相厭氧發(fā)酵反應(yīng)器這3 個方面進行了闡述。在以后的研究中,應(yīng)重點關(guān)注高效、經(jīng)濟的秸稈預(yù)處理方法;選取水解酸化階段和產(chǎn)甲烷階段的最佳反應(yīng)條件,提高水解酸化產(chǎn)物中乙酸的含量和產(chǎn)甲烷階段中甲烷的產(chǎn)量和含量;在秸稈中摻混廚余垃圾、動物糞便等富含氮素的有機垃圾,加快其降解速率,減輕環(huán)境壓力,降低生產(chǎn)成本;開發(fā)結(jié)構(gòu)簡單、操作方便的反應(yīng)器,降低設(shè)備的制造成本和運行成本。如能在以上關(guān)鍵技術(shù)上獲得突破,農(nóng)作物秸稈的兩相厭氧發(fā)酵工藝將會有廣闊的應(yīng)用前景。
參考文獻
[1] 席北斗.有機固體廢棄物管理與資源化技術(shù)[M].北京:國防工業(yè)出版社,2006.
[2] 吳振興,陳曉曄,楊占春,等.秸稈兩相厭氧消化產(chǎn)酸相發(fā)酵工藝[A].第三屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集 (下) [C]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2006.329-332.
[3] 胡紀(jì)萃,周孟津,左劍惡,等.廢水厭氧生物處理理論與技術(shù)[M].北京:中國建筑工業(yè)出版社,2004.
[4] BECCARI M,MAFONE M,TORRISI L. Two –reactor system with partial phase separation for anaerobic treatment of olive oil mill effluents [J].Wat.Sci.Tech,1998,38(4):53-60.
[5] BABEL S,F(xiàn)UKUSHI K,SITANRASSAMEE B. Effect of acid speciation on solid waste liquefaction in anaerobic acid digester[J]. WaterRes,2004,38:2417-2423.
[6] 邊炳鑫,趙由才.農(nóng)業(yè)固體廢物的處理與綜合利用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.
[7] 楊世關(guān),李繼紅,孟卓,等.木質(zhì)纖維素原料厭氧生物降解研究進展[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2006,22:120-124.
[8] 陳育如,夏黎明,吳綿斌.植物纖維素原料預(yù)處理技術(shù)的研究[J].化工進展,1999(4):24-26.
[9] ZHANG RUIHONG,ZHANG ZHIQIN. Biogasification of rice straw with anaerobic phased solids digester system [J].Bioresource Technology,1999,68:235-245.
[10] 李濤,蔣磊.農(nóng)作物秸稈發(fā)酵制乙醇的研究進展[J].當(dāng)代生態(tài)農(nóng)業(yè),2005(4):17-19.
[11] CHEN HONGZHANG,WANG HUI,ZHANG AIJUN,etal. Biogasification of steamexplode wheat straw by atwo-phased digestion system [J]. Transactions of theCSAE,2005,21(11):116-120.
[12] 陳小華,朱洪光.農(nóng)作物秸稈產(chǎn)沼氣研究進展與展望[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2007,23(3):279-283.
[13] 周俊虎,戚峰,程軍,等.不同來源污泥對稻草發(fā)酵產(chǎn)氫影響的研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(工學(xué)版),2007,41(5):761-764.
[14] 宋安東,任天寶,謝慧,等.化學(xué)預(yù)處理對玉米秸稈酶解糖化效果的影響[J].化學(xué)與生物工程,2006,23(8):31-33.
[15] 侯霖,薛冬樺,李濤,等.玉米秸稈預(yù)處理及水解生成可發(fā)酵性糖 [J]. 長春工業(yè)大學(xué)學(xué)報 (自然科學(xué)版),2007,28(1):26-28.
[16] 楊玉楠,陳亞松,楊敏.利用白腐菌生物預(yù)處理強化秸稈發(fā)酵產(chǎn)甲烷研究 [J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2007,26(5):1968-1972.
[17] 李連華,馬隆龍,袁振宏.農(nóng)作物秸稈的厭氧消化實驗研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2007,26(1):335-338.
[18] 鄭平,馮孝善.廢物生物處理[M].北京:高等教育出版社,2006.
[19] 李建政,任南琪,王愛杰,等.二相厭氧生物工藝相分離優(yōu)越性的探討 [J]. 哈爾濱建筑大學(xué)學(xué)報,1999,12(4):27-29.
[20] 趙丹,任南琪,王愛杰.pH,ORP 制約的產(chǎn)酸相發(fā)酵類型及頂級群落[J].重慶環(huán)境科學(xué),2003,25(2):33-35.
[21] 任南琪,劉敏,王愛杰,等.兩相厭氧系統(tǒng)中產(chǎn)甲烷相有機酸轉(zhuǎn)化規(guī)律[J].環(huán)境科學(xué),2003,24(4):89-93.
[22] 何品晶,潘修疆,呂凡,等.pH值對有機垃圾厭氧水解和酸化速率的影響[J].環(huán)境科學(xué),2006,26(1):57-61.
[23] 張波,史紅鉆,張麗麗,等.pH對廚余廢物兩相厭氧消化中水解和酸化過程的影響 [J]. 環(huán)境科學(xué),2005,25(5):665-669.
[24] 張波,蔡偉民,何品晶.pH調(diào)節(jié)方法對廚余垃圾兩相厭氧消化中水解和酸化過程的影響 [J]. 環(huán)境科學(xué),2006,26(1):45-49.
[25] 劉振玲,堵國成,劉和,等.食品廢棄物厭氧消化產(chǎn)乙酸的研究[J].環(huán)境污染與防治,2007,299(1):49-52.
[26] 趙杰紅,張波,蔡偉民.溫度對廚余垃圾兩相厭氧消化中水解和酸化過程的影響[J].環(huán)境科學(xué),2006,27(8):1682-1686.
[27] E R VIEITEZ,S GHOSH. Biogasification of solidwastes by two -phase anaerobic fermentation [J].Biomass and Bioenergy,1999,16:299-309.
[28] 劉廣青,張瑞紅,HAMED M EL MASHAD,等.批式與兩相高溫厭氧消化廚余垃圾和雜草廢棄物對比研究[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2006,11(6):111-115.
[29] 劉廣青,張瑞紅,董仁杰.兩相厭氧消化固體有機廢棄物的水解酸化規(guī)律 [J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,12(1):73-76.
[30] H N CHANAKYA,K G SRIKUMAR,V ANAND,et al.Fermentation properties of agroresidues,leaf biomassand urban market garbage in a solid phase biogas fer-menter [J]. Biomass and Bioenergy,1999,16:417 -429.
[31] H N CHANAKYA,SUSHAMA BORGAONKAR,GMEENA,et al. Solid phase fermentation of untreatedleaf biomass to biogas[J]. Biomass and Bioenergy,1993(5):369-377.